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gapdh内参不适合做内参(为什么Gapdh内参不适合做内参?)

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为什么Gapdh内参不适合做内参?

Gapdh内参简介

Gapdh(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)是一种广泛应用于基因表达研究中的常规内参,因其在不同组织和细胞中表达稳定、读数精确而备受青睐。在RT-qPCR等实验中,通过采集样本RNA,将其转录成cDNA,再以Gapdh为内参基因标准化,可以消除不同样本之间的RNA提取、反转录等操作过程带来的变异。

Gapdh内参存在的问题

然而,近期研究表明,不同细胞类型、不同生长条件下,Gapdh表达量的差异会对实验结果产生显著的影响。由于Gapdh是一种主要参与糖酵解代谢的酶,在某些实验条件下,其表达量会发生变化。例如,生长在高糖培养基中的细胞,相较于生长在低糖培养基中的细胞,Gapdh的表达量会明显升高;而在不同培养时间内,Gapdh表达量也有所波动,进一步对实验数据的准确性产生了负面影响。

其他理由

此外,多年以来,一直存在着误用或滥用Gapdh内参的问题。许多研究者在RT-qPCR中使用Gapdh作为唯一内参基因,而未进行其他有效内参的验证,导致实验结果的失真。随着研究的深入,其它多个内参基因的选择也得到了广泛的探究和应用。例如,在诸如肿瘤组织、神经系统等组织中,β-actin、18S rRNA、GAPL、B2M等内参基因的表达更适合反映实验样本中基因表达的真实情况。

结论

因此,更为准确和科学地选取内参基因,更有利于保证实验结果的准确性和重复性。就Gapdh内参而言,其稳定性和可靠性依赖于实验条件的严格控制以及与其他内参基因的比较验证,以确保结果充分可靠。